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說(shuō)說(shuō)色譜分離柱再生的兩種方法
點(diǎn)擊次數(shù):3919 更新時(shí)間:2019-10-29
   色譜分離柱長(zhǎng)時(shí)間使用后,造成柱入口樹(shù)脂損失,使死體積增大,分離度降低;長(zhǎng)時(shí)間未使用的色譜分離柱樹(shù)脂床進(jìn)入空氣會(huì)使樹(shù)脂產(chǎn)生溝流,造成分離度降低,同時(shí)造成離子色譜峰分叉。這些現(xiàn)象均造成定量結(jié)果的誤差。因此,離子色譜峰形一旦有變化,就要重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
 
  色譜分離柱是指離子交換色譜中的固定相中的一些帶電荷的基團(tuán),這些帶電基團(tuán)通過(guò)靜電相互作用與帶相反電荷的離子結(jié)合。如果流動(dòng)相中存在其他帶相反電荷的離子,按照質(zhì)量作用定律,這些離子將與結(jié)合在固定相上的反離子進(jìn)行交換。
 
  色譜分離柱是蛋白純化技術(shù)中常用的一種純化方法,其原理是指被分離物質(zhì)所帶的電荷可與離子交換劑所帶的相反電荷結(jié)合,這種帶電分子與固定相之間的結(jié)合作用是可逆的,在改變pH或者用逐漸增加離子強(qiáng)度的緩沖液洗脫時(shí),離子交換劑上結(jié)合的物質(zhì)可與洗脫液中的離子發(fā)生交換而被洗脫到溶液中。由于不同物質(zhì)的電荷不同,其與離子交換劑的結(jié)合能力也不同,所以被洗脫到溶液中的順序也不同,從而被分離出來(lái)。
 
  色譜分離柱的再生方法有兩種:
 
 ?。?)先用25ml蒸餾水通過(guò)柱子以除去緩沖鹽類,再用25ml甲醇沖洗,以除去由于分配效應(yīng)而殘存在骨架中的雜質(zhì),再用25ml蒸餾水除去不溶于甲醇的殘存鹽類,后用緩沖液平衡。
 
 ?。?)先用0.1mol/L的檸檬酸洗滌,然后用水洗滌(不要用堿性溶液,以防硅膠基質(zhì)溶解),后用緩沖液平衡。